FROTIS SANGUINEO
FROTIS SANGUINEO

 

OSERVACION MICROSCOPICA DEL FROTIS SANGUINEO

INTRODUCCION

La sangre esta compuesta por una parte liquida denominada plasma o suero y una parte sólida que engloba a los elementos formes como ser: Glóbulos Rojos, Glóbulos Blancos y Plaquetas.

Se debe tomar en cuenta que el extendido no debe ser ni muy grueso ni muy delgado para su correcta visualización microscópica.

OBJETIVOS

·        Reconocer y diferenciar  los diferentes constituyentes celulares.

·        Aprender a realizar un correcto extendido.

·        Describir las deferencias de los glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas en un frotis sanguíneo.

FUNDAMENTO TEORICO

LA SANGRE Y SUS COMPONENTES

La sangre es un líquido viscoso que fluye en las arterias, venas y capilares de todos los  vertebrados, este líquido es de color amarillento, pero, debido a la presencia del pigmento hemoglobínico contenido en los eritrocitos o hematíes (Glóbulos Rojos) tiene el color característico de rojo.

La sangre se divide en dos fases o elementos que son:

1.      Fase Liquida.- compuesto por el plasma sanguíneo o suero.

2.      Fase Sólida.- compuesto por elementos formes que incluye a los glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas.

Plasma sanguíneo

El plasma sanguíneo es una solución acuosa de una composición compleja que contiene un 91% de agua, 8 % de proteínas y algunos rastros de otros materiales que pueden ser hormonas, electrolitos, etc. Los componentes del plasma se forman en el hígado (albúmina  y fibrógeno), las glándulas endocrinas (hormonas) y otros en el intestino.

En esta porción liquida de la sangre se encuentran inmersos los elementos formes. Además es un líquido salado y de color amarillento divisado y es más espeso que el agua.

El plasma es una mezcla de  proteínas, aminoácidos, glúcidos, lípidos, sales, hormonas, enzimas, anticuerpos, urea, gases en disolución y sustancias inorgánicas como sodio, potasio, cloruro de calcio, carbonato, bicarbonato.

Glóbulos Rojos

A los glóbulos rojos también se las conoce como eritrocitos o hematíes. Transportan oxigeno hacia las demás células del cuerpo y gracias al componente hemoglobino en su estructura, de la misma manera transporta dióxido de carbono hacia los pulmones.

Los hematíes constituyen entre 4’500000  a 5’000000 millones por milímetro cúbico o microlito. Tienen un diámetro de 6  a 8 micras.

Estos corpúsculos carecen de núcleos, por la cual no deben ser considerados estrictamente como células. De hecho contienen algunas vías enzimáticas y su citoplasma esta ocupado por un 96% por hemoglobina, proteína encargada de transportar oxigeno y dióxido de carbono. Los eritrocitos tienen forma de disco bicóncavo, deprimido en el centro.

Los glóbulos rojos se forman en la médula ósea, especialmente en los huesos largos y planos. La hematopoyesis es el proceso por la cual se lleva a cabo esta formación.

Los hematíes aproximadamente viven 120 días, luego son sistemáticamente reemplazados por nuevos hematíes creados en el proceso eritropoyesis.   

Glóbulos Blancos

Los glóbulos blancos o leucocitos forman parte de los efectores celulares del sistema inmunológico, y son células con capacidad migratoria que utilizan la sangre como vehículo para tener acceso a diferentes partes de la anatomía. Los leucocitos son los encargados de destruir los agentes infecciosos y las células infectadas, y también secretan sustancias protectoras como los anticuerpos, que combaten a las infecciones.

El conteo normal de leucocitos está dentro de un rango de 4.500 y 11.500 células por mm³ (o microlitro) de sangre, variable según las condiciones fisiológicas (embarazo, estrés, deporte, edad, etc.) y patológicas (infección, cáncer, inmuno-supresión, aplasia, etc.). El recuento porcentual de los diferentes tipos de leucocitos se conoce como "fórmula leucocitaria".

Según las características microscópicas de su citoplasma (tintoriales) y su núcleo (morfología), se dividen en:

1.      Granulocitos o células polimorfo-nucleares: son los neutrófilos, basófilos y eosinófilos; poseen un núcleo polimorfo y numerosos gránulos en su citoplasma, con tinción diferencial según los tipos celulares, y

2.      Agranulocitos o células monomorfo-nucleares: son los linfocitos y los monocitos; carecen de gránulos en el citoplasma y tienen un núcleo redondeado.

1.      Granulocitos o células polimorfo-nucleares

a)      Neutrófilos, presentes en sangre entre 2.500 y 7.500 células por mm³. Son los más numerosos, ocupando entre un 55% y un 70% de los leucocitos. Se tiñen pálidamente, de ahí su nombre. Se encargan de fagocitar sustancias extrañas (bacterias, agentes externos, etc.) que entran en el organismo. En situaciones de infección o inflamación su número aumenta en la sangre. Su núcleo característico posee de 3 a 5 lóbulos separados por finas hebras de cromatina, por lo cual antes se los denominaba "polimorfo-nucleares" o simplemente "poli-nucleares", denominación errónea.

b)      Basófilos: se cuentan de 0,1  a 1,5 células por mm³ en sangre, comprendiendo un 0,2-1,2% de los glóbulos blancos. Presentan una tinción basófila, lo que los define. Segregan sustancias como la heparina, de propiedades anticoagulantes, y la histamina que contribuyen con el proceso de la inflamación. Poseen un núcleo a menudo cubierto por los gránulos de secreción.

c)       Eosinófilos: presentes en la sangre de 50 a 500 células por mm³ (1-4% de los leucocitos) Aumentan en enfermedades producidas por parásitos, en las alergias y en el asma. Su núcleo, característico, posee dos lóbulos unidos por una fina hebra de cromatina, y por ello también se las llama "células en forma de antifaz".

2.      Agranulocitos o células monomorfo-nucleares

a)      Monocitos: Conteo normal entre 150 y 900 células por mm³ (2% a 8% del total de glóbulos blancos). Esta cifra se eleva casi siempre por infecciones originadas por virus o parásitos. También en algunos tumores o leucemias. Son células con núcleo definido y con forma de riñón. En los tejidos se diferencian hacia macrófagos o histiocitos.

b)      Linfocitos: valor normal entre 1.300 y 4000 por mm³ (24% a 32% del total de glóbulos blancos). Su número aumenta sobre todo en infecciones virales, aunque también en enfermedades neoplásicas (cáncer) y pueden disminuir en inmunodeficiencias. Los linfocitos son los efectores específicos del sistema inmunológico, ejerciendo la inmunidad adquirida celular y humoral. Hay dos tipos de linfocitos, los linfocitos B y los linfocitos T.

Los linfocitos B están encargados de la inmunidad humoral, esto es, la secreción de anticuerpos (sustancias que reconocen las bacterias y se unen a ellas y permiten su fagocitosis y destrucción). Los granulocitos y los monocitos pueden reconocer mejor y destruir a las bacterias cuando los anticuerpos están unidos a éstas (ozonización). Son también las células responsables de la producción de unos componentes del suero de la sangre, denominados inmunoglobulinas.

Los linfocitos T reconocen a las células infectadas por los virus y las destruyen con ayuda de los macrófagos. Estos linfocitos amplifican o suprimen la respuesta inmunológica global, regulando a los otros componentes del sistema inmunológico, y segregan gran variedad de citoquinas. Constituyen el 70% de todos los linfocitos.

Tanto los linfocitos T como los B tienen la capacidad de "recordar" una exposición previa a un antígeno específico, así cuando haya una nueva exposición a él, la acción del sistema inmunológico será más eficaz.

Plaquetas

Las plaquetas (trombocitos) son fragmentos celulares pequeños (2-3 μm de diámetro), ovales y sin núcleo. Se producen en la médula ósea a partir de la fragmentación del citoplasma de los megacariocitos quedando libres en la circulación sanguínea. Su valor cuantitativo normal se encuentra entre 150.000 y 450.000 plaquetas por mm³ (en España, por ejemplo, el valor medio es de 226 000 por microlitro con una desviación estándar de 46 000[2] ).

Las plaquetas sirven para taponar las lesiones que pudieran afectar a los vasos sanguíneos. En el proceso de coagulación (hemostasia), las plaquetas contribuyen a la formación de los coágulos (trombos), así son las responsables del cierre de las heridas vasculares. Ver trombosis. Una gota de sangre contiene alrededor de 250.000 plaquetas.

  

Frotis sanguíneo:

Es la  extensión de sangre realizada sobre un portaobjeto y a partir de la cual se observarán, al microscopio, las características de las células sanguíneas.

El frotis sanguíneo se usa para análisis  rutinario  que  acompaña  a  todo  hemograma,  ya  sea  en forma manual o automatizado.

Este  preparado  entrega  valiosa  información  en  casos  como  las  leucemias, deficiencias  de  hierro,  trastornos  genéticos  de  la  forma  de  los  eritrocitos, posibles deficiencias de vitamina B12.

Procedimiento para realizar un frotis sanguíneo

  1. Depositar la muestra en una de las extremidades del portaobjeto
  2. Con otro portaobjetos o cubreobjetos realizar un desplazamiento uniforme de la muestra, con un ángulo de 45º C aproximadamente.

Partes del frotis sanguíneo

Cabeza: La observación microscópica en esta sana no es recomendable ya que es una zona en donde existe demasiada aglutinación de glóbulos rojos.

Cuerpo: Zona ideal para la observación microscópica, condicionalmente es una zona en la cual los glóbulos y plaquetas no están aglutinados ni esparcidos.

Cola: Zona de observación microscópica, en la cual se observa a los glóbulos y plaquetas desparramados. Esta franja tiene un acabado en forma de barba jaspeada.

MATERIALES


·        Microscopio compuesto

·        Una lanceta estéril

·        Algodón

·        Alcohol

·        Portaobjetos

·        Cubreobjetos


PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Extracción sanguínea

1.      Masajear la yema del dedo medio o anular

2.      Limpiar la yema del dedo (se sugiere escoger el dedo de la mano menos utilizada), con algodón empapado en alcohol.

3.      Mantener presionado el dedo, realizar una punción suavemente y rápida con la lanceta estéril a un costado de la yema o pulpejo del dedo seleccionado.

4.      Del dedo surgirá un corro de sangre, hacer caer una gota de sangre en un extremo del portaobjetos (para la muestra húmeda, y otra gota en el medio del portaobjetos para la muestra seca).

5.      Tapar la punción realizada con un pedazo de algodón seco (no debe estar empapado en alcohol), esto para que no se produzca hemorragia.

6.      Colocar un cubreobjetos (o portaobjetos) perpendicularmente (ángulo de 45º C aproximadamente) sobre la gota de sangre y deslizarlo hacia el otro extremo del portaobjetos.

7.      Observar al Microscopio.

Observación microscópica

  1. Muestra seca

1.      Colocar un cubreobjetos encima de la muestra sanguínea del portaobjetos que contiene la muestra sanguínea en el centro.

2.      Acercar a la platina del microscopio para su posterior observación en las medidas de 4x, 10x, y 40x

  1. Muestra húmeda

1.      Una vez realizada la extensión correcta se debe dejar secar la muestra por unos minutos.

2.      Luego se coloca unas gotas de alcohol (metanol para fijar), se deja actuar el alcohol de dos a cuatro minutos (el alcohol es volátil).

3.      Una vez evaporado el alcohol se aplica unas gotas del colorante y luego se deja secar por 10  a 15 minutos.

4.      Cuando la muestra este seca, se debe lavar con piseta (contiene agua destilada). Luego secar y limpiar la parte inferior del portaobjetos que contiene a la muestra.

5.      La muestra adquiere un color violeta azulado a la cual se coloca el aceite de inmersión para su posterior observación.

          

          

         

Resultado de la observación microscópica

1.      Con débil aumento explorar la preparación para localizar la zona en la que el frotis es más perfecto. Los lugares más aptos son aquellos en los que la extensión de los glóbulos se ha conseguido en una sola capa, están bien teñidos y no se han producido precipitados de los colorantes. Cuando se observe una zona apta, pasar a aumentos más fuertes.

2.      En el campo del microscopio, se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos, teñidos en color rojo. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes. Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo. Hay varias clases de glóbulos blancos:

v     Los linfocitos algo mayores que los glóbulos rojos, con un núcleo muy voluminoso que ocupa casi todo el glóbulo, aparece fuertemente teñido en color violeta oscuro.

v     Los monocitos son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, hay que desplazarse por la preparación para encontrar alguno. Tienen un núcleo muy grande y redondeado que aparece teñido en color violeta.(Es bueno que recuerdes su función que es la de fagocitosis).

v     Los poli-nucleares presentan el núcleo como fragmentado o con aspecto arrosariado (en forma de arroz).

v     Los eosinófilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el núcleo teñido de color azul marino. Estos glóbulos aumentan su número en caso de parasitosis o procesos alérgicos.

v     Los basófilos presentan un núcleo teñido de rojo y las granulaciones del citoplasma de color muy oscuro.

3.      Las plaquetas aparecen como pequeños fragmentos teñidas de color violeta. Estas células intervienen en el proceso de coagulación sanguínea.

4.      El número promedio de glóbulos rojos en el hombre es de 5.000.000 por mm3 de sangre. La cifra media de glóbulos blancos es de 7.000  a 8.000 por mm3. Hay por tanto un glóbulo blanco por cada 600 ó 700 glóbulos rojos. Por lo tanto para ver todos los tipos de glóbulos blancos debes buscarlos en distintos campos de la preparación. El número de plaquetas es de unas 250,000 por mm3

Aplicación de frotis sanguíneo.- La aplicación del frotis esta en el área del estudio de la estructurara morfológica de las células sanguíneas.

 

BIBLIOGRAFIA

·        <<<www.http://html.rincondelvago.com/extension-o-frotis-sanguineo.html>>>

·        <<<www.http://www.educa.madrid.org/portal/c/portal/layout?p_l_id=2288.152>>>

·        <<<www.http://www.juntadeandalucia.es/averroes/recursos_informaticos/concurso2001/accesit_4/frotissangre.html>>>

·        <<<www.http://www.scribd.com/doc/16034154/Frotis-Sanguineo>>>

·        <<<http://es.wikipedia.org/wiki/Sangre>>>

·        <<<www.http://www.monografias.com/trabajos/sangre/sangre.shtml>>>

·        <<<www.http://www.bsburgos.org/la_sangre.htm>>>

·        <<<www.http://www.invenia.es/oepm:e99401810>>>

·        <<<www.http://kidshealth.org/parent/en_espanol/general/blood_esp.html>>>

·        <<<www.http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003665.htm>>>

 

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